发光细菌的急性毒性试验

添加日期：2017年10月17日 阅读：4308

发光细菌作为毒性检测的生物学方法，因其简便、快速、灵敏且成本较低而日益受到重视。本试验项目推荐两个方法。一为国家环境保护局于1995年发布的发光细菌法(GB/T15441-1995)，采用的是海洋发光细菌菌种;二为淡水发光菌法，采用的是淡水型发光菌种。

明亮发光杆菌T3法(A)

本方法适用工业废水、纳污水体及实验室条件下，可溶性化学物质的水质急性毒性监测。



1.原理

基于发光细菌相对发光度与水样毒性组分总浓度呈显著负相关(P≤0.05)，因而可通过生物发光光度计测定水样的相对发光度，以此表示其急性水平。

水质急性毒性水平可按选用相当的参比物氯化汞浓度(以mg/L为单位)来表征，或选用EC50值(半数有效浓度，以样品液百分浓度为单位)来表征。

2.样品的采集与保存

①采样瓶使用聚四氟乙烯衬垫的玻璃瓶，务必清洁、干燥。采集水样时，瓶内应充满水样不留空气。采样后，用塑胶带将瓶口密封。

②毒性测定应在采样后6h内进行。否则应在2-5℃下保存样品，但不得超过24h。报告中应写明水样采集时间和测定时间。

③对于含固体悬浮物的样品须离心或过滤去除，以免干扰测定。

3.仪器设备

①生物发光光度计：配置2ml或5ml测试管。

当氯化汞标准溶液浓度为0.10mg/L时，发光细菌的相对发光度为50%，其误差不超过±10%。

②2ml或5ml测试样品管(具标准磨口塞，为制造比色管的玻璃料制作，由专业玻璃仪器厂制造)，分别适用于相应型号的生物发光光度计。

③微量注射器：10μl。

④注射器：lml。

⑤定量加液瓶：5ml。

⑥吸管：2ml、10m1、25ml。

⑦试剂瓶：l00ml。

⑧量筒：100ml,500ml。

⑨棕色容量瓶：50ml、250ml、1000ml。

⑩半微量滴定管(配磨口试液瓶，全套仪器均为棕色)：l0ml。

4.试剂和材料

除另有说明外，本方法所用试剂均应为符合国家标准的分析纯试剂、蒸馏水或同等纯度的水。

①氯化汞HgCl2。

②氯化钠NaCl，化学纯。

③明亮发光杆菌T3小种(PhotobacteriumphosphoreumT3spp.)冻干粉，安瓶瓶包装，每瓶0.5g，在2-5℃冰箱内有效保存期为6个月。新制备的发光细菌休眠细胞(冻干粉)密度不低于每克800万个细胞;当按5(3)④步骤将冻干粉复苏2min后即发光(可在暗室内检验，肉眼应见微光)，稀释成工作液后每毫升菌液不低于1.6万个细胞((5ml测试管)或2万个细胞(2ml测试管)(均为稀释平板法测定)。在生物发光光度计上测出的初始发光量应在600-1900mV之间，低于600mV允许将倍率调至“×2”档，高于1900mV允许将倍率调整至“×0.5”档。仍达不到标准者，更换冻干粉。

④氯化钠溶液，3g/100m1：氯化钠3g于玻璃容器内，用量筒加蒸馏水l00ml。

⑤氯化钠溶液，2g/l00ml氯化钠2g，加蒸馏水l00ml于试剂瓶内，2-5℃保存。

⑥参比物氯化汞标准溶液：0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.18、0.20、0.22、0.24mg/L。

⑦氯化汞母液，ρ=2000mg/L:1/万分析天平精称密封保存良好的无结晶水氯化汞0.1000g于50ml容量瓶中，用3g/100m1氯化钠溶液稀释至刻度，置2-5℃冰箱备用，保存期6个月。

⑧氯化汞工作液，ρ=2mg/L：用移液管吸氯化汞2000mg/L母液l0ml于l000ml容量瓶中，用3g/l00ml氯化钠溶液定容。再用移液管吸取氯化汞20mg/L液25ml于250m1容量瓶中，用3g/l00m]氯化钠溶液定容。将此液倒入配有半微量滴定管的试液瓶，然后用3g/l00ml氯化钠溶液将氯化汞2mg/L溶液按表5-3-6稀释成系列浓度(一律采用50ml容量瓶)。氯化汞工作液保存期不能超过24h，超过者务必重配。



责任编辑：赵帅超 WWW.1168.TV 2017-10-17 16:16:17

文章来源：